产品货号：
BTN71201
中文名称：
柱式动物RNA提取试剂盒
英文名称：
Animal RNA column extraction kit(Trizol)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒是动物总RNA快速提取试剂动物RNA提取试剂盒(BTN3070)的柱式升级产品，可用于从各种动物组织(包括白细胞)快速提取总RNA。
保存：2～8℃，有效期1年。
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
相关搜索：柱式动物RNA提取试剂盒，动物RNA柱式提取试剂盒，Animal RNA column extraction kit(Trizol)
- 操作更加简单快速，整个过程只需要不到十分钟(对一个样品而言)。
- RNA纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
- 一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
- 适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
- 得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
- 性价比高于进口的柱式RNA提取产品。
| 组分 | 规格 |
| 溶液A | 50mL |
| 溶液B | 25mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
| 说明书 | 1份 |
保存：2～8℃，有效期1年。
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
- 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
- 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
- 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1～5×106悬浮细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过1×106个细胞。
- 对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50～100mg组织加1mL溶液A，用匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织(细胞中含大量正在复制的DNA)，建议组织的使用量不要超过50mg/mL溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
- 对RNAhold保存组织：先用纸吸去RNAhold液体后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
- 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解。
- 将裂解物转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯仿(1mL溶液A需0.2mL氯仿)，振荡器上充分振荡混均30秒。
- 12000rpm室温离心3～5分钟。
- 将上清液(约0.6～0.8mL的无色透明水相，有时水相比重大时，水相在下层，有机相即蓝相在上层，吸取时应吸取透明水相)转移到一个干净的1.5mL塑料离心管中。注意：离心后下层有机相和中间层含有DNA和蛋白质，避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行，否则容易吸出交界面的不可见的丝状DNA。
- 加入等体积的溶液B，充分颠倒混匀。
- 将一半的溶液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
- 将剩下的一半溶液转移到同一离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。
- 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
- 加0.3mL通用洗柱液，室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
- 室温12000rmp离心半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free收集管中，加入50～100μL RNA洗脱液。
- 室温12000rmp离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
- RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA最好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶(in TAE或TBE buffer)上电泳，一定要使用RNA专用上样液RNAload，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。
- RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度(1 OD260的RNA=40μg/mL)，进而计算出RNA的产量(浓度×体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
- RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
- 上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，我们初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合(如果使用TBE作电泳液的话)形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液(如RNAload)。 - 如何确认和去处除污染的基因组DNA？
如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用百奥莱博的非酶的DNA去除剂DNA Scavenger或RNase-free DNase，由于RNase-free DNase一般都有残留的RNase污染，所以必须严格按照厂家提供的使用说明书进行操作。
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