产品货号：
BTN71201
中文名称：
柱式动物RNA提取试剂盒
英文名称：
Animal RNA Purification Kit
产品规格：
50T
发货周期：
1～3天
产品价格：
询价
本试剂盒用于从各种动物组织（包括白细胞）快速提取总RNA。得到的RNA可直接用于RT-PCR、Northern杂交、cDNA合成等实验。
保存：室温，其中溶液A需置于4℃，有效期1年。
本试剂盒足够50次微量柱式提取，每次可以处理100mg左右的组织。
氯仿，台式离心机
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
RNA检测：
1.上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，本公司初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用TBE作电泳液的话）形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液。
2.如何确认和去处除污染的基因组DNA？
如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用本公司的RNase-free DNase。
相关搜索：柱式动物RNA提取试剂盒，动物RNA提取，组织DNA提取，细胞DNA提取，DNA抽提，Animal RNA Purification Kit
- 操作简单快速，整个过程只需要不到十分钟（对一个样品而言）。
- RNA纯度更高，OD260/OD280一般在2.0左右。
- 一般不含用RT-PCR可以检测到的基因组DNA污染。
- 适用于培养细胞、大部分动物组织和部分植物组织。
- 可以进行无氯仿操作，只是纯度稍微降低，但不影响使用。
| 组分 | 规格 |
| 动物RNA纯化溶液A | 50mL |
| 动物RNA纯化溶液B | 25mL |
| 离心吸附柱 | 50套 |
| 通用洗柱液 | 50mL |
| RNA洗脱液 | 10mL |
保存：室温，其中溶液A需置于4℃，有效期1年。
本试剂盒足够50次微量柱式提取，每次可以处理100mg左右的组织。
氯仿，台式离心机
下面的操作步骤是针对在1.5mL塑料离心管中进行的微量提取的，如果处理样品量大，请按比例增加各成份的用量并使用大的离心管和离心机。
- 根据组织细胞类型的不同分为下面及种情况使用：
- 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL动物RNA纯化溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组DNA充分断裂。
- 对悬浮细胞：离心收集细胞，吸尽液体，在每1～5×106悬浮细胞中加入1mL动物RNA纯化溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组DNA充分断裂。如果是fibroblasts或carcinoma cell，1mL溶液A的细胞使用量不要超过106个细胞。
- 对新鲜组织：先将剪切成小块新鲜组织或液氮保存的组织放入10mL或15mL塑料离心管中，每50～100mg组织加1mL动物RNA纯化溶液A，用Polytron剪切式匀浆器匀浆30秒左右。对肝、脾、胰、肾等细胞分裂十分旺盛的组织（细胞中含大量正在复制的DNA），建议组织的使用量不要超过50mg/mL动物RNA纯化溶液A，否则十分容易产生DNA污染。
也可以用液氮研磨：在研钵中加入液氮，再加入50～100mg新鲜组织，然后研磨成粉后转移到1.5mL离心管中，再加入1mL动物RNA纯化溶液A，震荡30秒混匀。 - 对非冻型组织RNA保存液或RNAlater等保存液保存的组织：先用纸吸去保存液后再剪切成小块，其余操作同新鲜组织的处理。
- 对贴壁细胞：吸尽培养液，在每10平方厘米细胞中加入1mL动物RNA纯化溶液A，用枪轻柔吹打数次，确保细胞全部裂解并且让基因组DNA充分断裂。
- 如果进行无氯仿操作（所得RNA纯度稍低，但一般不影响后续使用），则将上步所得的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，12000rpm室温离心3～5分钟。
- 如果进行带氯仿操作（所得RNA纯度比免氯仿操作稍高），则将上步所得的细胞裂解物或匀浆液转移至一个干净的1.5mL塑料离心管中，然后加入0.2倍体积的自备氯仿(1mL动物RNA纯化溶液A需0.2mL氯仿)，振荡器上充分振荡混均30秒，12000rpm室温离心3～5分钟。
- 将上清液转移到一个干净的2mL塑料离心管中。注意：无氯仿操作时，离心后管底是细胞碎片和结缔组织纤维。带氯仿操作时，离心后分上下层，下层有机相和上下层中间含有DNA和蛋白质，吸取上清时避免触及，否则将产生蛋白质和DNA污染。为保险起见，可以留下100μL上清液不取。同时吸取上清时最好缓慢进行。
- 加入等体积的动物RNA纯化溶液B，充分颠倒混匀。
- 分次（一般需要2～3次）将加入动物RNA纯化溶液B后的混合液转移到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。如果溶液粘稠，可以延长离心时间到2分钟。
- 加0.7mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃收集管中的穿透液。一次洗涤一般足够去除杂质。
- 再加0.3mL通用洗柱液到离心吸附柱中，12000rpm室温离心半分钟，弃穿透液。此步可以省略。
- 再室温12000rpm干甩半分钟。此步十分重要，否则残留的通用洗柱液会影响RNA的使用。
- 将离心吸附柱转移到一自备的RNase-free 1.5mL塑料离心管中，加入50～100μL RNA洗脱液。
- 室温12000rpm离心半分钟，离心管中溶液即为RNA样品，可以立即使用或存放于-80℃待用。
RNA检测：
- RNA的电泳检测：本试剂盒提取的RNA最好用甲醛变性胶电泳，如果在非变性的普通琼脂糖胶（in TAE或TBE buffer）上电泳，一定要使用RNA专用上样液，千万不要使用常用的DNA上样液，因为DNA上样液没有经过去RNase处理，也不能将RNA变性，得到的带型将十分杂乱。
- RNA完整性的电泳检测：如果需要做Northern杂交，强烈建议用户使用甲醛变性胶进行RNA电泳，因为非变性胶不能分离所有的RNA分子。
- RNA产量产率测定：将5～10μL RNA溶于TE缓冲液中(pH7.5～8.2之间)检测其在OD260的光吸收。通过光吸收可以得出RNA浓度（1 OD260的RNA=40μg/mL），进而计算出RNA的产量（浓度X体积)和产率(RNA产量/组织用量)。
- RNA纯度测定：无污染的总RNA的OD260/OD280一般在1.8～2.1之间(具体数值与其碱基组成和溶液成分等多种因素有关)，高于此范围则分别表示样品可能有蛋白质污染，但一般不影响RT-PCR等反应。
1.上样孔里的红色荧光物一定是DNA污染吗？
不是。用TAE或TBE电泳液和非变性胶电泳RNA时容易产生此现象，本公司初步研究发现大部分红色荧光物是变性不充分的单链RNA通过碱基互补或通过硼酸络合（如果使用TBE作电泳液的话）形成的复合物，加RNase处理后，这些红色荧光物(RNA)一般会消失。为避免此现象，建议最好使用甲醛变性胶电泳和RNA专用上样液。
2.如何确认和去处除污染的基因组DNA？
如果怀疑有DNA污染，可以用RNase处理RNA样品，然后再电泳。如果上样孔里的红色荧光物不消失，则表示是基因组DNA污染。进一步确认可以使用PCR扩增法。去除污染的DNA可以使用本公司的RNase-free DNase。
相关搜索：柱式动物RNA提取试剂盒，动物RNA提取，组织DNA提取，细胞DNA提取，DNA抽提，Animal RNA Purification Kit